پژوهشگر

همکاران پژوهشگر

چکیده پژوهش

در این پژوهش ابتدا با استفاده از وکتور بیانی PCDH مهندسی شده حاوی ژن های Atoh1 و Ngn1 و دارای ژن گزارشگر GFP برای انتقال و بررسی افزایش بیان این ژن ها در سلول های MEF استفاده گردید. برای این منظور ابتدا پس از تکثیر کامل ژن های Atoh1 و Ngn1 با تکنیک واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) با کمک آنزیم Pfu، اقدام به کلونینگ ژن های Ngn1 و Atoh1 به داخل پلاسمید pTZ57R/T و سپس ساب کلون به داخل وکتور ویروسی PCDH نمودیم. سپس ترانسفکشن هر وکتور نوترکیب (PCDH-Ngn1 و PCDH-Atoh1) به داخل سلول های MEF با کمک کیت لیپوفکتامین طبق دستورالعمل شرکت سازنده آن انجام شد. سپس تایید صحت انتقال و بیان ژن ها از طریق بررسی ایجاد رنگ فلورسنت در زیر میکروسکوپ فلورسنت و بررسی مولکولی با کمک روش semi-quantitative RT-PCR و در نهایت جهت بررسی بیان پروتئین های Ngn1 و Atoh1 در سلول ها از روش SDS-Page و وسترن بلات استفاده گردید. یافته های این مطالعه نشان داد که سلول های لایه ی تغذیه کننده ی MEF که به این روش دستکاری ژنتیکی شده اند بیان ژن های Ngn1 و Atoh1 و فاکتورهای لازم جهت تمایز سلول های ESC به سلول های مویی در آنها اتفاق افتاده و می توان از این روش و این سلول ها برای تولید سلول های مویی شنوایی در درمان ناشنوایی بهره گرفت.

خلاصه نتایج حاصله

یافته های این مطالعه نشان داد که سلول های لایه ی تغذیه کننده ی MEF که به این روش دستکاری ژنتیکی شده اند بیان ژن های Ngn1 و Atoh1 و فاکتورهای لازم جهت تمایز سلول های ESC به سلول های مویی در آنها اتفاق افتاده و می توان از این روش و این سلول ها برای تولید سلول های مویی شنوایی در درمان ناشنوایی بهره گرفت.

فایل های پژوهش