پژوهشگر

همکاران پژوهشگر

چکیده پژوهش

سرطان امروزه با بیش از ۱۰ میلیون مورد جدید و بیش از ۶ میلیون مرگ ناشی از آن هر ساله در سراسر جهان یکی از مهم ترین دلایل مرگ ومیر محسوب می گردد. لوسمی لنفوبلاستیک حاد(ALL) شآیع ترین سرطآن بین کودکان و نوجوانان است. داروهای سیتوتوکسیک مورد استفاده بدلیل عوارض جانبی موجب مرگ در بیماران می گردد. ترکیبات مشتق از گیاهان اخیرا بدلیل داشتن اثرات سیتوتوکسیک در درمان سرطان مورد توجه قرار گرفته اند. رآهکارهای درمانی جدید بر فعال سازی مسیرهای داخلی و خارجی آپوپتوز و مرگ سلولی استوار است. مطالعات مختلف نشان دهنده این است که pterosiIbene که در زغال اخته و بعضی از میوه های دیگر وجود دارد، در چند نوع سرطان خواص ضد سرطانی موثری داشته است . این تاثیرات در خارج از بدن از طریق القاء اپوپتوز ، مهار متاستاز و تغییر در چرخه سلولی بوده است . در داخل بدن با ایجاد مسمومیت ناچیز ، تومورزایی و متاستاز را مهار کرده است. نقش PT در اپوپتوز و نیز افزایش فعالیت Caspase ها در رده های سلولی سرطان پستان ، سلول های ملانومی، سرطان مثانه مشخص شده است.در مورد دوز موثر هر یک از دو مورد فوق بر روی سلولهای لوسمیک میلوبلاستی ابهاماتی وجود دارد . اثرات هر یک از آنها به صورت ادجوانت در ترکیب با داروهای روتین مورد استفاده در شیمی درمانی از مواردی است که می تواند مورد توجه قرار گیرد . هدف از مطالعه حاضر بررسی اثر Pterostilbene برروی رده سلولی لنفوبلاستی لوسمیک همراه یا بدون داروی شایع مورد استفاده در درمان لوسمی های لنفوبلاستیک حاد دگزامتازون می باشد .۱-      کشت سلول: سلولهادر RPMI۱۶۴۰ که حاوی ۱۰ درصد سرم جنین گاو ، پنی سیلین( u/ml ۱۰۰ ۱۰۰ ) ، استرپتومایسین (µg/ml ۱۰۰ ) ، گلوتامینmg/ml ۳(پیرویک اسید mg/ml ۱۱ ، ۲ - مرکاپتواتانول ( ۲-ME ) و NAHCO۳ (۳۷/۰ %) است کشت داده می شوند و در انکوباتور º C۳۷ با ۵% CO۲ و رطوبت ۹۸% نگهداری می شود . ترکیبات مورد نظر ( ترکیبات موثر گیاهیEGCG و Pterostilbene با غلظت های متفاوت ۲۰و ۴۰۳۰و۸۰ میکرومولار همراه یا بدون داروهای مورد مصرف (دگزامتازون) در DMSO حل شده و به سلولهای کشت شده در محیط کشت کامل اضافه می شود . به عنوان کنترل در کشت سلولی در محیط کشت کامل DMSO به تنهایی اضافه می گردد.    ۲- آزمایش پرولیفراسون سلولی با روش MTS : آزمایش پرولیفراسیون با استفاده از روش   MTS ۳- ( (۳-(۴,۵-Dimethylthiazol-۲-yl)- ۵-(۳-carboxymethethoxyphenyl) -۲-(۴-sulphophenyl) -۲H tetrazolium انجام میگیرد. . ۱۰۰میکرولیتر از محیط حاوی ۵۰۰۰ سلول از رده های مختلف سلولی در میکروپلیت ۹۶ خانه ای کشت داده می شوند. سلولهای با غلظت های مختلف ۲۰،۳۰،۴۰ و ۸۰µM   از ترکیبات Pterostilbene و EGCG   مورد نظر ۴۸ و ۷۲ ساعت در ۳۷ درجه سانتی گراد در انکوباتور Co۲ با ۹۸% رطوبت کشت داده می شود. سپس این محیط با ۱۰۰ میکرو لیتر محیط تازه و ۲۰ میکرولیتر از محلول MTS به مدت ۴-۱ ساعت انکوبه می گردد . جذب نوری در طول موج nm ۴۹۰ اندازه گیری می شود . میزان تکثیر سلولی با مقایسه جذب سلولهای مختلف و کنترل بررسی می گردد . سپس IC۵۰ در هر مورد تعیین می گردد. برای ترکی ب کردن دو ماده نی ز پس از بدست آوردن IC۵۰ هر کدام و غلظت مورد نظر دو ماده با هم ترکی ب می گردد.   دو ترکیب فوق همراه باداروی شی می درمانی دگزامتازون ونی ز دگزامتازون خودبه تنهای ی به سلول های محیط های کشت اضافه می شوند.۳- بررسی آپوپتوز و نکروز سلولی : بررسی آپوپتوز و نکروز سلولی با استفاده از کی ت مناسب خود بررسی می شود.سلول های مورد استفاده که زمان های مورد نظر در محی ط کشت در مجاورت ترکی بات کشت داده می شوند دوبار با PBS و سپس در بافر همراه با کی ت مخصوص آپوپتوز سوسپانسی ون می شوند. سلول ها با معرف های فراهم شده ی عنی Annexin-۷ و PI رنگ آمی زی شده و سپس با فلوسی تومتری بر روی FL۱,FL۲ آنالی ز می شوند.

خلاصه نتایج حاصله

سلول های مورد استفاده که زمان های مورد نظر در محی ط کشت در مجاورت ترکی بات کشت داده می شوند دوبار با PBS و سپس در بافر همراه با کی ت مخصوص آپوپتوز سوسپانسی ون می شوند. سلول ها با معرف های فراهم شده ی عنی Annexin-۷ و PI رنگ آمی زی شده و سپس با فلوسی تومتری بر روی FL۱,FL۲ آنالی ز می شوند.

فایل های پژوهش