پژوهشگر

همکاران پژوهشگر

چکیده پژوهش

ه دارو در نهایت منجر به دستاوردهای جدید برای غلبه بر مقاومت دارویی و بهبود بقای بیماران می شود. مقاومت دارویی در سرطان تخمدان دلایل مختلفی دارد که شامل افزایش غیرفعال شدن دارو، افزایش تعمیر DNA، تغییر در کنترل چرخه سلولی و تغییر در آپوپتوز است[۵]. آپوپتوز یا مرگ برنامه ریزی شده سلولی، فرایندی است که در پاسخ به محرک های خاص فعال می شود. این فرایند نقش مهمی در حذف سلولی در جنین زایی و همئوستازی نرمال ایفا می کند و هم چنین در جلوگیری و سرکوب رشد تومور نیز مشارکت دارد[۶]. عدم تنظیم آپوپتوز نه تنها نقش مهمی در بیماری زایی و پیشرفت سرطان تخمدان بازی می کند، بلکه هم چنین منجر به مقاومت به شیمی درمانی نیز می شود [۷,۸]. P۲۱ پروتئینی است که القا کننده توقف چرخه سلولی است و عضوی از خانواده مهار کننده کینازهای وابسته به سیکلین است. بیان این پروتئین بوسیله P۵۳بعد از آسیب به DNA القا می شود که باعث مهار کینازهای وابسته به سیکلین(CDK۲،CDK۳، CDK۴ وCDK۶ ) شده و سیکل سلولی را در فازG۱ متوقف کرده و مانع از انتقال به فاز Sمی شود . P۲۱ از طریق برهم کنش با PCNA قادر به توقف سیکل سلولی در فاز G۲ است [۹]. مطالعات متعددی نشان می دهند که P۲۱ نقش بسیار مهمی در مهار سرطان دارد. در شرایط استرس های سلولی خاص، بیان این پروتئین افزایش می یابد و منجر به افزایش آپوپتوز می شود. P۲۱ آپوپتوز را از طریق مکانیسم هایی که وابسته یا مستقل از P۵۳ هستندبه پیش می برد[۱۰]. PTEN ژن مهارکننده تومور است و غالبا در سرطان های مختلف از جمله سرطان سینه، مغز، اندومتر، ریه و تخمدان جهش می یابد [۱۱]. عملکرد این پروتئین در اثر جهش، حذف یا متیلاسیون پروموتور این ژن در بسیاری از سرطان ها کاهش می یابد. مسیر انتقال سیگنالPTEN PI۳K AKT نقش مهمی در تنظیم چندین فرایند بیولوژیکی مانند آپوپتوز، متابولیسم، تکثیر و رشد سلولی دارد. پروتئین PTENبه عنوان فسفاتاز عمل کرده و PIP۳را دفسفریله کرده و AKT را مهار می کند و از تکثیر سلولی جلوگیری کرده و آپوپتوز را القا می کند [۱۲,۱۳]. مطالعات مختلف نشان داده اند که بیان ژن های P۲۱ و Ptenدر بیماران مبتلا به سرطان تخمدان تغییر می کند[۱۴,۱۵].Pten مقاومت به شیمی درمانی(سیس پلاتین) را از طریق غیرفعال کردن مسیر PI۳K AKT کاهش داده و مولکول هدف مناسبی برای درمان سرطان تخمدان در مرحله مقاومت به شیمی درمانی است. مطالعات مختلف نشان داده اند که افزایش بیان P۲۱ باعث افزایش تاثیر سیس پلاتین در سرطان تخمدان می شود. این دارو ویژگی های فارماکولوژیکی مشابه عوامل ضدسرطان که بر روی رشد سلول، تمایز و آپوپتوز عمل می کنند نشان می دهد. مطالعات دیگر نشان داده اند که تاثیر والپروئیک اسید از طریق تنظیم بیان ژن در سطح مولکولی از طریق مکانیسم های اپی ژنتیکی است. این دارو بر روی بازآرایی کروماتین عمل می کند و مهارکننده هیستون داستیلاز است [۱۷]. VPA القا کننده آپوپتوز در بسیاری از سرطان ها است. تیمار مزمن لاین های سلولی سرطانی با VPA باعث کاهش میزان تکثیر سلول های سرطانی شده و هم چنین باعث افزایش فعالیت کاسپازهای ۲ و ۳ می شود[۱۸]. هم چنینVA باعث افزایش H۳K۹ استیله و افزایش بیان ژن های مهار کننده تومور در سرطان های مختلف می شود [۱۹]. با توجه به مطالب بیان شده، ما ابتدا بیان ژن های P۲۱ و Ptenرا در سلول های سرطان تخمدان حساس و مقاوم به داروی سیس پلاتین مطالعه خواهیم کرد تا درک بهتری از مکانیسم های مقاومت به دارو داشته باشیم. در مرحله بعد، پتانسیل درمانی والپروئیک اسید بر رده سلولی سرطان تخمدان انسان مقاوم به داروی سیس پلاتین را مورد بررسی قرار خواهیم داد. این مطالعات در آینده می تواند در جهت درمان سرطان مفید واقع شود. لای ن های سلولی حساس و مقاوم به داروی سبس پلاتی ن (A۲۷۸۰) از مرکز انی سی توپاستور ای ران تهی ه خواهد شد. لای ن های سلولی به صورت تک لای ه در محی ط RPMI که حاوی ۱۰ درصد FBS و ۱ درصد آنتی بی وتی ک های پنی سی لی ن و استرپتومای سی ن است و در شرای ط دمای ۳۷ درجه و ۵ درصد CO۲ کشت داده می شوند. سپس سلول ها با سی س پلاتی ن در غلظت های ۱۰۰-۱ می کرومولار و والپروئی ک اسی د در غلظت های ۳۰-۱ می لی مولار و مخلوط دو دارو در غلظت های مختلف به صورت جداگانه تی مار می شوند. بعد از گذشت ۲۴، ۴۸ و ۷۲ ساعت، برای به دست آوردن IC۵۰ تست MTT انجام خواهد شد. برای هر دارو، سه بار تکرار آزمای ش انجام می شود.در مرحله بعد، RNA کل سلول با استفاده از کی ت Trizol ازسلول ها استخراج شده و به cDNA تبدی ل خواهد شد. پرای مرها با استفاده از نرم افزارOligo ۷ طراحی می شود. برای سنجش بی ان ژن های های P۲۱ و Pten از Real Time PCR به روش سای بر گری ن استفاده خواهد شد. ژن رفرنسgapdh در نظر گرفته می شود. سپس نتای ج آنالی ز می شوند و می زان بی ان ژن مورد نظر بی ن تی مار و کنترل مقای سه خواهد شد. در مرحله بعد با استفاده از RIPA پروتئی ن را از سلول های هر دو لای ن استخراج خواهی م کرد و با استفاده از روشWestern blotting می زان بی ان پروتئی ن های P۲۱ و Ptenرا اندازه گی ری می کنی م. در مرحله بعد اثر سی س پلاتی ن و والپروئی ک اسی د بر می زان آپوپتوز با استفاده از روش فلوسای تومتری سنجش خواهد شد.

خلاصه نتایج حاصله

vpa سبب مهار رشد سلولی، القاء آپوپتوز و افزایش حساسیت به سیس پلاتین به خاطر تغییر بیان ژن فوق می باشد.

فایل های پژوهش