عنوان پژوهش: بررسی ارتباط SNP های rs3135388 ،rs9271366 و rs422951 لوکوس HLA با مولتیپل اسکلروزیس (M.S) در بیماران مراجعه کننده به مراکز درمانی شهرکرد با استفاده از روش های PCR-RFLP و توالی یابی DNA
    دستگاه اجرایی کارفرما: دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی
تاریخ اجرای پژوهش: 1392/10/15
مرکز مجری پژوهش: دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد

مکان اجرای پژوهش: دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد

پژوهشگر

نام و نام خانوادگی محل اشتغال فعلی رشته و گرایش تحصیلی آخرین مدرک تحصیلی محل اخذ مدرک تحصیلی
ناهید جیواد دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد مغز و اعصاب دکترای تخصصی (PhD) -
مرتضی هاشم زاده چالشتری دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد ژنتیک انسانی دکترای تخصصی (PhD) -
پیام قاسمی دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد ژنتیک انسانی دکترای تخصصی (PhD) -
شهر بانو پرچمی دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد ژنتیک انسانی دکترای تخصصی (PhD) -
فاطمه هیبتی دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد - - -

همکاران پژوهشگر

نام و نام خانوادگی محل اشتغال فعلی رشته و گرایش تحصیلی آخرین مدرک تحصیلی محل اخذ مدرک تحصیلی

چکیده پژوهش
ای ن مطالعه از نوع توصی فی - تحلی لی می ­ باشد. در ای ن مطالعه تعداد ۲۰۰ بی مار مبتلا به MS که به انجمن MS شهرکرد مراجعه کرده و ثبت مشخصات نموده اند و ی ا به مراکز درمانی نورولوژی استان مراجعه کرده اند به صورت آسان و در دسترس نمونه گی ری انجام خواهد شد. معی ار ورود به مطالعه افراد بی مار، بر مبنای تشخی ص بی ماری براساس معی ارهای مک دونالد (McDonald) و تای ی د دو نفر پزشک متخصص مغز و اعصاب می باشد (۳۵). همچنی ن افرادی که قبل از تشخی ص بی ماری MS دارای معی ارهای تشخی ص هر نوع بی ماری نورودژنراتی و بوده اند از مطالعه خارج می شوند. در ای ن مطالعه تعداد ۲۰۰ نفر از افرادی که هی چ گونه بی ماری نورودژنراتی و نداشته اند و بر اساس سن، جنس و محل زندگی تقری باً با افراد بی مار مشابهت دارند، به عنوان افراد گروه کنترل مورد بررسی قرار می گی رند. نمونه گی ری از افراد بی مار و کنترل با روش آسان و در دسترس به عمل می آی د، در کنار نمونه­ گی ری پرسشنامه­ ای حاوی اطلاعات دموگرافی و سابقه پزشکی بی مار به همراه شجره­ نامه و تست­ های انجام شده برای هر بی مار تکمی ل می ­ گردد و از کلی ه بی ماران ی ا والدی ن افراد زی ر سن قانونی رضای ت­ نامه کتبی اخذ می ­ شود. نمونه­ های خون هر بی مار در لوله­ های حاوی ماده ضد انعقاد EDTA گرفته می­ شود و تا زمان انجام آزمایشات در فریزر ۲۰- درجه سانتی­ گراد نگهداری می­ گردد. جهت استخراج DNA از نمونه­ های خون از گوی چه­ های سفی د خون محی طی به روش فنل-کلروفرم به میزان کافی DNA استخراج و در دمای ۲۰- درجه سانتی­ گراد نگهداری می­ شود. پرایمرهای اختصاصی برای بررسی SNP های مرتبط با بی ماری لوکوس HLA با کمک نرم افزارهای Gene Runner و Oligo طراحی می ­ گردد و واکنش PCR با توجه به هر پرای مر انجام می­ پذیرد و محصول PCR حاصل از هر نمونه پس از انجام الکتروفورز بر روی ژل پلی اکری ل آمی د ۸%، جهت تای ی د مورد ارزی ابی و بررسی قرار خواهد گرفت. سپس محصول PCR به منظور غربالگری نمونه ها از نظر وجود ی ا عدم وجود SNP های مربوطه به روش RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) بررسی خواهد شد. سپس نتای ج حاصل از هضم آنزی می نمونه های بی مار و سالم بر روی ژل پلی اکری ل آمی د ۸% مورد بررسی قرار گرفته و فراوانی هر SNP و نوع آن مشخص می گردد. در انتها کلی ه ی ژنوتی پ های ی افت شده به روشMethod Sanger Sequencing مورد تای ی د قرار می گی رند. نتای ج حاصل با استفاده از نرم افزار SPSS (Version ۲۰) و با کمک آزمون آماری t-Test برای پارامترهای کمی و آزمون آماری مربع کای دو به منظور بررسی ارتباط SNP های rs۳۱۳۵۳۸۸، rs۹۲۷۱۳۶۶ و rs۴۲۲۹۵۱ لوکوس HLA با مولتی پل اسکلروزی س (M.S) مورد تجزی ه و تحلی ل قرار می گی رد.
خلاصه نتایج حاصله
نمونه­ های خون هر بی مار در لوله­ های حاوی ماده ضد انعقاد EDTA گرفته می­ شود و تا زمان انجام آزمایشات در فریزر ۲۰- درجه سانتی­ گراد نگهداری می­ گردد. جهت استخراج DNA از نمونه­ های خون از گوی چه­ های سفی د خون محی طی به روش فنل-کلروفرم به میزان کافی DNA استخراج و در دمای ۲۰- درجه سانتی­ گراد نگهداری می­ شود. پرایمرهای اختصاصی برای بررسی SNP های مرتبط با بی ماری لوکوس HLA با کمک نرم افزارهای Gene Runner و Oligo طراحی می ­ گردد و واکنش PCR با توجه به هر پرای مر انجام می­ پذیرد و محصول PCR حاصل از هر نمونه پس از انجام الکتروفورز بر روی ژل پلی اکری ل آمی د ۸%، جهت تای ی د مورد ارزی ابی و بررسی قرار خواهد گرفت. سپس محصول PCR به منظور غربالگری نمونه ها از نظر وجود ی ا عدم وجود SNP های مربوطه به روش RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) بررسی خواهد شد. سپس نتای ج حاصل از هضم آنزی می نمونه های بی مار و سالم بر روی ژل پلی اکری ل آمی د ۸% مورد بررسی قرار گرفته و فراوانی هر SNP و نوع آن مشخص می گردد. در انتها کلی ه ی ژنوتی پ های ی افت شده به روشMethod Sanger Sequencing مورد تای ی د قرار می گی رند.

فایل های پژوهش
فایل

Back to Top