پژوهشگر

همکاران پژوهشگر

چکیده پژوهش

مطالعات مختلف نشان دهنده افزایش مقاومت باکتری ها نسبت به آنتی بیوتیک ها هستند در این بین سه باکتری اسینتوباکتربومانی، استافیلوکوکوس اورئوس وانتروکوکوس فکالیس از اهمیت ویژه ای برخورداراند. اسینتوباکتربومانی کوکوباسیل گرم منفی و غیرتخمیرکنده گلوکز است و به علت مقاومت دارویی بالای خود یکی از عوامل شایع عفونت های بیمارستانی است. استافیلوکوکوس اورئوس یکی ازپاتوژن های خطرناک انسانی با طیف وسیعی از بیماری ها ازجمله عفونت های پوستی وادراری و تنفسی می باشد. انتروکوک های مقاوم در برابر وانکومایسین(VRE) به ویژه انتروکوکوس فکالیس یکی دیگر از این نمونه های ارگانیسم های مقاوم هستند. باتوجه به خاصیت ضدباکتریایی سه قسمت ریشه، ساقه و بذر گیاه بومی تلخ بیان و بررسی نشدن اثر این گیاه در منابع معتبر برروی سه باکتری استافیلوکوکوس اورئوس، اسینتوباکتربومانی وانتروکوکوس فکالیس در این مطالعه اثرضدمیکروبی عصاره هیدروالکی ریشه، ساقه و بذر این گیاه بر روی باکتری های مذکور بررسی شده است. براساس بررسی های انجام شده و تعیین MIC و MBC هرکدام از عصاره های هیدروالکی ،MIC و MBC سه قسمت این گیاه برای باکتری استافیلوکوکوس اورئوس به ترتیب128 و512میکروگرم بر میلی لیتر،32و128 میکروگرم بر میلی لیتر،128 و512 میکروگرم بر میلی لیتر و برای باکتری اسیتوباکتربومانی به ترتیب 64 و256 میکروگرم بر میلی لیتر ،64و256 میکروگرم بر میلی لیتر ،256و1024 میکروگرم بر میلی لیتر و برای باکتری انتروکوکوس فکالیس به ترتیب 64و256 میکروگرم بر میلی لیتر،128و512 میکروگرم بر میلی لیتر،32و128میکروگرم بر میلی لیتر تعیین شده است. براساس این مطالعه ریشه، ساقه و بذر تلخ بیان بیشترین MBC و MICرا به ترتیب روی استافیلوکوکوس اورئوس ،انتروکوکوس فکالیس و آسینتو باکتر بومانی داشته اند. نتایج پژوهش حاضر در مورد اثرات ضد میکروبی این سه گیاه امیدوارکننده بوده و می تواند دریچه ی جدید، برای طراحی آنتی بیوتیک های موثر بگشاید. بخش دوم -خلاصه اجرایی مطالعات مختلف نشان دهنده افزایش مقاومت باکتری ها نسبت به آنتی بیوتیک ها هستند. در این بین سه باکتری اسینتوباکتر بومانی، استافیلوکوکوس اورئوس وانتروکوکوس فکالیس از اهمیت ویژه ای برخوردارند. با توجه به این مقاومت های دارویی گسترده لزوم طراحی و به کار گیری دارو های جدید احساس می گردد. بهره گیری از گیاهان دارویی طب سنتی یکی از راه های دستیابی به داروهای جدید می باشد. در این پژوهش اثرات ضد باکتریایی سه قسمت ریشه،ساقه و بذر گیاه تلخ بیان مورد بررسی قرار گرفتند. مهم ترین یافته های پژوهش ما با هدف بررسی اثرات ضد باکتریایی و خواص فیتوشیمیایی سه قسمت ریشه،ساقه و بذر گیاه تلخ بیان عليه باکتري هاي اسینتو باکتر بومانی، استافيلوکوکوس اورئوس وانتروکوکوس فکالیس نشان داد این گیاهان می توانند گزینه های مناسبی برای طراحی آنتی بیوتیک های جدید علیه میکروارگانیسم های مقاوم به دارو های معمول باشند. در این تحقیق ابتدا با اخذ مجوز و معرفی نامه از دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد هماهنگی های لازم جهت عصاره گیری و آزمایشات باکتریولوژی انجام شد. سپس ریشه،ساقه و بذرگیاه تلخ بیان از عطاری لقمان شهرکرد تهیه وپس از تایید توسط کارشناس عصاره گیری به روش ماسراسیون در مرکز تحقیقات گیاهان دارویی دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد انجام شد. برای عصاره گیری ابتدا 100گرم از گیاه در ترکیب با الکل 70% در حجم 1 لیتر به مدت 72 ساعت در محیط دور از نور نگهداری شد. سپس مایع حاصله بعد از 2 بار فیلتر با کاغذ صافی 5/0واتمن روتاری شد. پس از تقطیر در انکوباتور با 37درجه سانتی گراد قرار گرفت تا عصاره با قوام عسلی بدست آمد و سپس به وسیله ی نرمال سالین محلول استوک ازآن تهیه شد . سوش استاندارد باکتری های استافیلوکوکوس اورئوس(ATCC12923) ، اسینتو باکتر بومانی(PTCC1855)و انتروکوکوس فکالیس(ATCC29212) از سازمان پژوهش های علمی و صنعتی ایران تهیه شد. سپس برای بررسی اثر آنتی باکتریال عصاره هیدروالکی سه قسمت ریشه،ساقه و بذرگیاه تلخ بیان بر روی باکتری های استافیلوکوکوس اورئوس، اسینتوباکتربومانی و انتروکوکوس فکالیس از روش broth microdulotion استفاده شد. در این روش از پلیت های 96 چاهکی استریل استفاده شدبه طوری که چاهک اول به عنوان کنترل منفی (شامل محیط کشت به علاوه عصاره) وچاهک دوم به عنوان کنترل مثبت (شامل محیط کشت به علاوه باکتری) انتخاب شد. پس از اضافه نمودن محیط کشت، عصاره و باکتری به چاهک های میکروپلیت، نمونه ها در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. غلظت اخرین (رقیق ترین) چاهکی که هیچ کدورتی در آن ایجاد نشده بود معادل MIC قرار داده شد. برای تعیین MBC متعاقبا 10 میکرولیتر از لوله های MIC برروی محیط مولر-هینتون آگار کشت داده شد و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت انکوبه شد و کمترین غلظتی از عصاره که باکتری در آن قادر به رشد نبود، به عنوان MBC تعیین شد. انجام آزمایشات برای تعیین MIC و MBC برای هر عصاره با سه بار تکرار انجام شد و سپس داده ها با SPSS تجزیه و تحلیل شد. نتایج حاصل از اثرات ضد باکتریایی ریشه، ساقه و بذر این گیاه به این صورت بوده که باکتری استافیلوکوکوس اورئوس به ترتیب در برابر غلظت های 128و32و128میکروگرم بر میلی لیتر ریشه، ساقه و بذر گیاه تلخ بیان حساس بوده و این سه قسمت گیاه باکتری استاف آرئوس را در این غلظت ها مهار میکنند. لذا MIC برای این سه قسمت گیاه به ترتیب غلظت های 128و32و128 میکروگرم بر میلی لیترمی باشد و از طرفی این باکتری به ترتیب درغلظت های 512و128و512 میکروگرم بر میلی لیتراز ریشه ،ساقه و بذراین گیاه کاملا از بین می رود و می توان گفت که حداقل غلظت کشندگی برای این سه قسمت گیاه (MBC) به ترتیب غلظت های512و128و512 میکروگرم بر میلی لیتر می باشد. هم چنین نتایج حاصل از بررسی اثر ضدباکتریایی عصاره هیدرو الکلی سه قسمت ریشه، ساقه و بذر گیاه تلخ بیان برباکتری اسینتو باکتر بومانی نشان می دهند که این عصاره هیدروالکلی نیز به ترتیب در غلظت های 64و64و256 میلی گرم بر میلی لیتر می تواند این باکتری را مهار کند( MIC) و همچنین حداقل غلظت کشندگی برای ریشه،ساقه و بذراین گیاه نیز به ترتیب 256و256و1024میکروگرم بر میلی لیتر می باشد. و هم چنین حداقل غلظت مهارکنندگی و حداقل غلظت کشندگی ریشه، ساقه و بذرگیاه تلخ بیان برای باکتری انتروکوکوس فکالیس به ترتیب64و128و32میکروگرم بر میلی لیترو256و512و128میکروگرم بر میلی لیتر به دست آمد. یافته های مطالعه ی ما در رابطه با بررسی اثرات ضد میکروبی بخش های مختلف گیاه تلخ بیان نشان داد، بذر گیاه تلخ بیان با MIC برابر با µg/ml32 بیشترین اثر مهاری را بر روی انتروکوکوس فکالیس دارد. بیشترین تاثیر مهاری بر روی ا.اورئوس مربوط به ساقه این گیاه با MIC برابر µg/ml32 بود. اثر ساقه و ریشه ی این گیاه بر روی اسینتوباکتر بومانی در هر دو مورد با MIC برابر µg/ml64 بیشترین اثر بوده است. تمام موارد ذکر گردیده برای MBC مورد بررسی نیز صدق می کند.

خلاصه نتایج حاصله

نتایج حاصل از اثرات ضد باکتریایی ریشه، ساقه و بذر این گیاه به این صورت بوده که باکتری استافیلوکوکوس اورئوس به ترتیب در برابر غلظت های 128و32و128میکروگرم بر میلی لیتر ریشه، ساقه و بذر گیاه تلخ بیان حساس بوده و این سه قسمت گیاه باکتری استاف آرئوس را در این غلظت ها مهار میکنند. لذا MIC برای این سه قسمت گیاه به ترتیب غلظت های 128و32و128 میکروگرم بر میلی لیترمی باشد و از طرفی این باکتری به ترتیب درغلظت های 512و128و512 میکروگرم بر میلی لیتراز ریشه ،ساقه و بذراین گیاه کاملا از بین می رود و می توان گفت که حداقل غلظت کشندگی برای این سه قسمت گیاه (MBC) به ترتیب غلظت های512و128و512 میکروگرم بر میلی لیتر می باشد. هم چنین نتایج حاصل از بررسی اثر ضدباکتریایی عصاره هیدرو الکلی سه قسمت ریشه، ساقه و بذر گیاه تلخ بیان برباکتری اسینتو باکتر بومانی نشان می دهند که این عصاره هیدروالکلی نیز به ترتیب در غلظت های 64و64و256 میلی گرم بر میلی لیتر می تواند این باکتری را مهار کند( MIC) و همچنین حداقل غلظت کشندگی برای ریشه،ساقه و بذراین گیاه نیز به ترتیب 256و256و1024میکروگرم بر میلی لیتر می باشد. و هم چنین حداقل غلظت مهارکنندگی و حداقل غلظت کشندگی ریشه، ساقه و بذرگیاه تلخ بیان برای باکتری انتروکوکوس فکالیس به ترتیب64و128و32میکروگرم بر میلی لیترو256و512و128میکروگرم بر میلی لیتر به دست آمد.

فایل های پژوهش