پژوهشگر

همکاران پژوهشگر

چکیده پژوهش

در ای ن تحقی ق ابتدا با بررسی متون، پروپوزال طرح تهی ه شد. سپس با اخذ مجوز و معرفی نامه از دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، هماهنگی های لازم جهت عصاره گی ری و آزمای شات باکتری ولوژی انجام خواهد شد. در ای ن پژوهش ابتدا گی اهان فرفی ون ، بذر ورث و گونه بومی گل اروانه از عطاری لقمان شهرکرد تهی ه و عصاره گی ری به روش ماسراسی ون در مرکز تحقی قات گی اهان داروی ی دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد انجام خواهد شد . عصاره گی ری به ای ن نحوخواهد بود که 100 گرم از گی اه در ترکی ب با الکل 70% در حجم 1 لی تر به مدت 72 ساعت در محی ط دور از نور نگهداری خواهد شد. مای ع حاصله را بعد از دو بار فی لتر کردن با کاغذ صافی 0.5 واتمن در دستگاه روتاری ( تقطی ر در شرای ط خلا) قرار داده و بعد از تقطی ر درگرمخانه 37 درجه قرارخواهد گرفت تا در نهای ت عصاره با قوام عسلی به دست بی ای د و به وسی له نرمال سالی ن ی ک محلول استوک از آن تهی ه خواهد شد. سوش استاندارد باکتری استافی لوکوس اورئوس ،اسی نتوباکتربومانی با ATCC 12923 و PTCC 1855 از سازمان پژوهش های علمی و صنعتی ای ران به صورت لی وفلی زه تهی ه خواهد شد. سپس به روشbroth micro dilution اثر آنتی باکتری ال عصاره هیدروالکلی گی اهان فرفی ون ، بذر ورث و گونه بومی گل اروانه و سدی م کلرای د بر روی باکتری اسی نتوباکتر بومانی و استافی لوکوکوس اورئوس بررسی خواهد شد: روشbroth micro dilution : ای ن روش طبق پروتکل 2016 CLSI انجام خواهد شد. ابتدا از عصاره محلول ذخی ره (stock) تهی ه خواهد شد. سپس رقی ق سازی عصاره در چاهک های الای زا حاوی محی ط کشت TSB به روش Serial dilution (رقی ق سازی ی ک دوم) انجام خواهد شد. برای تعی ی ن اثر ضد می کروبی عصاره ها از روش براث می کرودای لوشن (Broth Microdilution) در پلی ت 96 چاهک استری ل، مطابق استاندارد نی م مک فارلند (105CFU/ml ) استفاده خواهد شد. در ای ن روش چاهک اول به عنوان کنترل منفی ( شامل محی ط کشت به علاوه عصاره) و چاهک دوم به عنوان کنترل مثبت ( شامل محی ط کشت به علاوه باکتری ) انتخاب خواهد شد. پس از اضافه نمودن محی ط کشت ( 95 می کرولی تر) و عصاره ها (100می کرولی تر) به چاهک های می کروپلی ت، مقدار 5 می کرولی تر باکتری اضافه و پس از رقی ق کردن آن ها، نمونه ها در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت انکوبه خواهند شد. غلظت آخری ن (رقی ق تری ن) چاهکی که هی چ کدورتی در آن ای جاد نشده باشد معادل (MIC (Minimum Inhibitory concentration قرار داده(16). برای تعی ی نMBC متعاقباً 10 می کرولی تر از لولـه هـای قبـل از لولـه MIC بـرروی محـی ط مـولر- هی نتون آگار کشت داده خواهد شد و در دمای 37درجه سانتی گرادبه مدت 24 ساعت انکوبه خواهد شد؛ و کمتری ن غلظتی از عصاره که باکتری در آن قادر به رشد نباشد ، به عنوان MBC تعی ی ن خواهد . انجام آزمای شات برای تعی ی ن MIC و MBC برای هر عصاره با سه تکرار انجام خواهد شد(24).

خلاصه نتایج حاصله

ظت آخری ن (رقی ق تری ن) چاهکی که هی چ کدورتی در آن ای جاد نشده باشد معادل (MIC (Minimum Inhibitory concentration قرار داده(16). برای تعی ی نMBC متعاقباً 10 می کرولی تر از لولـه هـای قبـل از لولـه MIC بـرروی محـی ط مـولر- هی نتون آگار کشت داده خواهد شد و در دمای 37درجه سانتی گرادبه مدت 24 ساعت انکوبه خواهد شد؛ و کمتری ن غلظتی از عصاره که باکتری در آن قادر به رشد نباشد ، به عنوان MBC تعی ی ن خواهد . انجام آزمای شات برای تعی ی ن MIC و MBC برای هر عصاره با سه تکرار انجام خواهد شد(24).

فایل های پژوهش